Abstract
- Der Aufbau von Atemkomplexen zu makromolekularen Superkomplexen ist derzeit ein aktuelles Thema, insbesondere im Zusammenhang mit neu verfügbaren Strukturdetails. Die meisten Arbeiten wurden jedoch bisher mit gereinigtem, detergenzienlöslichem Material durchgeführt, und eine Bestätigung vor Ort fehlt. Wir haben uns hier vorgenommen, die Erfassung der respiratorischen Superkomplexbildung in lebenden Zellen zu ermöglichen. Fluoreszierende Sensorproteine wurden an bestimmten Positionen an der Cytochrom-C-Oxidase platziert, von der vermutet wurde, dass sie sich entweder an der Oberfläche eines CI1CIII2CIV1-Superkomplexes oder in diesem Superkomplex vergraben befinden. Im Gegensatz zu anderen Loci berichteten Sensoren an den Untereinheiten CoxVIIIa und CoxVIIc über eine dichte Proteinumgebung, die durch deutlich verkürzte Fluoreszenzlebensdauern nachgewiesen wurde. Gemäß der 3D-Modellierung werden CoxVIIIa und CoxVIIc im Superkomplex CI1CIII2CIV1 vergraben. Die Unterdrückung der hochkomplexen Gerüstproteine HIGD2A und CoxVIIa2l ging einher mit einer Erhöhung der Lebensdauer des CoxVIIIa-Sensors entsprechend der Freisetzung von CIV aus Superkomplexen. Auffallend ist, dass unsere Daten starke Hinweise auf eine definierte stabile, hochkomplexe Konfiguration in situ liefern.