Beschreibung

• Intrazelluläre Membranfusion beruht auf einer konservierten Maschinerie, welche die ATPase NSF, Rab-GTPasen, Tethering-Faktoren und SNAREs als essentielle Fusionsfaktoren einschließt. Die Funktion von Tethering-Faktoren ist hierbei nach wie vor unklar. Im intrazellulären Transport handelt es sich primär um multimere Komplexe mit einem Gesamtgewicht von 300-800 kD, deren Untereinheiten nur geringe Sequenzähnlichkeiten zeigen. Der vakuoläre Class C Vps/HOPS Komplex (C-HOPS Komplex) zählt zu den Tethering-Komplexen und ist an der Fusion von Hefevakuolen beteiligt. Zudem konnten wir kürzlich einen weiteren HOPS-ähnlichen Komplex am Endosom nachweisen. Während wir in bisherigen Arbeiten die Regulation des C-HOPS Komplexes untersuchen, wollen wir hier Struktur und Funktion des C-HOPS Komplexes und des endosomalen Komplexes und deren Untereinheiten aufklären. Dazu werden wir folgende Ansätze wählen: 1) Etablierung eines Reinigungsprotokolls für die effiziente Anreicherung der Gesamtkomplexe und ihrer Untereinheiten/Unterkomplexe aus Hefe; 2) Untersuchung der Assemblierung des C-HOPS Komplexes und des endosomalen Komplexes in vivo; 3) Strukturelle Untersuchungen der Untereinheiten und des Komplexes mit Hilfe von Röntgenstrukturanalyse und Elektronenmikroskopie. 4) Rekonstitution des Tetherings in vitro. Da der C-HOPS Komplex und seine Untereinheiten phylogenetisch konserviert sind, und Mutationen des Komplexes mit verschiedenen Krankheiten assoziiert sind, ist ein Einblick in die Funktion und Struktur ein Meilenstein auf dem Weg zu einem besseren Verständnis des endolysosomalen Systems in Eukaryonten.

Projektlaufzeit

• 01.02.2016 - 30.04.2018